westernblot实验步骤

Western，也叫Westernblot,Westernblotblot,Western印迹法，是检测蛋白质抗体的重要方法之一。

实验步骤：

1.用块称量。

2.用液氮，将组织块粉碎。

3.加入RIPA缓冲剂(每克组织3mlRIPA)、PMSF(每克组织30μl,10mg/mlPMSF)，继续保持4℃的Polytron(每克组织3mlRIPA)。

4.PMSF(每克组织30μl,10mg/mlPMSF)，冰上孵化30分钟。

5.移入离心管，4℃大约20,000g(15,000转)。

6.将上清作为细胞裂解液，分装-20℃保存。

7.蛋白质浓度测定采用Bradford比色法。

8.取相同质量的细胞裂解液(体积*蛋白质浓度)，加2×电泳加样缓冲液。

9.用开水浴3分钟。

10.上样。

11.电泳(浓缩胶20mA，分离胶35mA)。

12.转膜仪转膜(100mA40分钟)。

13.薄膜为丽春红染色，胶用考马斯亮蓝染色。

14.显色Westernblot试剂盒。

15.比较记录分析。